Mokhoa oa ho khetha sebaesekele se nepahetseng sa mocheso bakeng sa litlhoko tsa hau tsa lipatlisiso

Thermal cyclerske lisebelisoa tsa bohlokoahali ha ho tluoa ho baeloji ea limolek'hule le lipatlisiso tsa liphatsa tsa lefutso. Sesebediswa sena se boetse se tsejwa e le motjhini wa PCR (polymerase chain reaction), e leng sa bohlokwa bakeng sa ho hodisa DNA, e leng se etsang hore e be motheo wa ditshebediso tse fapaneng tse kenyeletsang cloning, sequencing le gene expression analysis. Leha ho le joalo, ho na le likhetho tse ngata 'marakeng hoo ho khetha sebaesekele se nepahetseng sa mocheso bakeng sa litlhoko tsa hau tsa lipatlisiso e ka bang mosebetsi o boima. Mona ke lintlha tse ling tsa bohlokoa tseo u ka li nahanang ha u etsa khetho.

1. Utloisisa litlhoko tsa hau tsa lipatlisiso

Pele u kenella ka har'a litlhaloso tsa libaesekele tse fapaneng tsa mocheso, ho bohlokoa ho lekola litlhoko tsa hau tse ikhethileng tsa lipatlisiso. Nahana ka mofuta oa teko eo u tla e etsa. A na u sebelisa PCR e tloaelehileng, quantitative PCR (qPCR), kapa sesebelisoa se sebetsang hantle haholo? E 'ngoe le e' ngoe ea lits'ebetso tsena e ka hloka likarolo le bokhoni bo fapaneng ba sebaesekele se futhumatsang.

2. Mocheso Range le Uniformity

Mofuta oa mocheso oa sebaesekele sa mocheso ke ntlha ea bohlokoa. Boholo ba li-protocol tsa PCR li hloka mohato oa denaturation hoo e ka bang 94-98°C, mohato oa annealing ho 50-65°C, le mohato oa katoloso ho 72°C. Etsa bonnete ba hore sebaesekele se futhumatsang seo u se khethang se khona ho sebetsana le lithempereichara tsena le hore mocheso o ajoa ka ho lekana ho mojule. Ho se tšoane ha mocheso ho ka ama lipatlisiso tsa hau ka ho baka liphello tse sa tsitsang.

3. Block sebopeho le bokhoni

Libaesekele tse futhumatsang li tla ka mefuta e fapaneng ea lifomate, ho kenyeletsoa lipoleiti tsa liliba tse 96, lipoleiti tsa liliba tse 384, esita le lipoleiti tsa liliba tse 1536. Khetho ea sebopeho sa block e lokela ho lumellana le litlhoko tsa hau tsa ho feta. Haeba o etsa liteko tse phahameng, o ka hloka sebopeho se seholo sa li-block. Ka lehlakoreng le leng, bakeng sa liteko tse nyane, poleiti ea seliba sa 96 e kanna ea lekana. Ho feta moo, nahana ka hore na o hloka li-module tse feto-fetohang ka lifomate tse fapaneng, kaha sena se ka eketsa ho feto-fetoha ha lipatlisiso tsa hau.

4. Lebelo le Katleho

Sebakeng sa kajeno sa lipatlisiso tse potlakileng, nako ke ea bohlokoa. Batla sebaesekele se futhumatsang se nang le matla a ho futhumatsa ka potlako le ho tsidifatsa. Mefuta e meng e tsoetseng pele e ka phethela potoloho ea PCR ka nako e ka tlase ho metsotso e 30, e potlakisa ts'ebetso ea hau haholo. Ho feta moo, likarolo tse kang mokhoa o potlakileng kapa lebelo la ho futhumatsa ka potlako li eketsa ts'ebetso, e leng se u lumellang hore u sebetse lisampole tse ngata ka nako e fokolang.

5. Sehokelo sa Mosebelisi le Software

Sebopeho se bonolo sa mosebedisi se bohlokoa bakeng sa ts'ebetso e sebetsang hantle. Batla sebaesekele se futhumatsang se nang le sekirini sa ho ama se hlakileng, likhetho tse bonolo tsa mananeo, le liprothokholo tse seng li setiloe. Mefuta e tsoetseng pele e kanna ea tla le software e lumellang tlhahlobo ea nako ea nnete le tlhahlobo ea data, e leng molemo haholo lits'ebetsong tsa qPCR. Etsa bonnete ba hore software e lumellana le litsamaiso tsa hau tse teng mme e khona ho sebetsana le tlhahiso ea data eo u e hlokang.

6. Litlhahlobo tsa Lichelete

Thermal cyclers e fapana haholo ka theko, kahoo ho bohlokoa ho ba le tekanyetso pele u qala ho e reka. Le hoja ho ka 'na ha e-ba tekong ea ho tsamaea le khetho e theko e tlaase, nahana ka bohlokoa ba nako e telele ba ho kenya chelete mochine oa boleng bo phahameng o finyellang litlhoko tsa hau tsa lipatlisiso. U se ke ua nahana feela ka theko ea pele ea theko, empa hape le litšenyehelo tsa lisebelisoa, tlhokomelo, le lintlafatso tse ka bang teng.

7. Tšehetso ea Moetsi le Tiisetso

Qetellong, nahana ka boemo ba tšehetso le tiisetso e fanoeng ke moetsi. Sebaesekele se tšepahalang sa mocheso se lokela ho fana ka waranti e felletseng mme e be le tšehetso ea bareki bakeng sa ho rarolla mathata le tlhokomelo. Sena se u bolokela nako le lisebelisoa ha nako e ntse e ea.

ha re phethela

Ho khetha se nepahetsengsebaesekele se chesanghobane litlhoko tsa hau tsa lipatlisiso ke qeto ea bohlokoa e ka amang katleho ea liteko tsa hau. Ka ho ela hloko litlhoko tsa hau tse ikhethileng, mofuta oa mocheso, sebopeho sa module, lebelo, sebopeho sa mosebelisi, tekanyetso, le tšehetso ea moetsi, o ka etsa khetho e nang le tsebo e tla ntlafatsa bokhoni ba hau ba ho etsa lipatlisiso le ho fumana liphetho tse tšepahalang haholoanyane. Ho tsetela nako ts'ebetsong ena ea khetho ho tla qetella ho lefa boleng le katleho ea mosebetsi oa hau oa mahlale.