LITLHAKISO TSA BOTLALO

Nakong ea maikutlo a PCR, ho na le mabaka a mang a ho sebelisa khafetsa.
Ka lebaka la kutloisiso e phahameng haholo ea PCR e nkoa e le e 'ngoe ea lintlha tsa bohlokoahali tse amang litholoana tsa pcre mme li ka hlahisa litholoana tse ntle.
Ka tsela e tšoanang ke litlhahiso tse fapaneng tse lebisang liphethong tse mpe. Haeba karolo e le 'ngoe kapa tse ling tsa bohlokoa tsa motsoako oa pcko ka boeona kapa karabelo ea kalafo ka boeona lia thibeloa kapa tsa ho kena-kenana le tsona. Sena se ka lebisa ho katleho e fokotsehileng le esita le litholoana tse mpe tsa moea.
Ntle le thibelo, tahlehelo ea ho ts'epahala ha theko ea nyutlelie e ka hlaha ka lebaka la ho romella le / kapa maemo a polokelo pele ho tlhahiso ea mohlala. Ka ho khetheha, lithemparetjha tse phahameng kapa polokelo e sa lekaneng li ka baka tšenyo ea lisele le nyutlelie acid. Ho kenella ha lisele le ho bama ka lisele le ho ba le lisosa tse tsebahalang tsa ho senyeha ha sona le bothata ba 1 le 2). Maemong ana, esita le ho itšehla thajana ebile ho tlhokahaha ho ke ke ha thusa.

Setšoantšo sa 1 | Kameho ea ho se tšepahale ho DNA
Agarose Gel Electrophoresis e bontšitse hore boleng ba DNA bo ile ba qheleloa ka thoko ho tse ngata tsa likoloi tsa likoloi li ne li fapane haholo. DNA ea bolelele bo fapaneng ba sekhechana bo ne bo le teng ho li-subsimets tse tlase ho latela mokhoa oa ho lokisa. DNA o ne a bolokiloe feela ha a tsitsitsoe ho sampole ea Native ea Native Frozen le budgered sonfdin e sa nke lehlakore. Ts'ebeliso ea setsebi sa acidic ea acidic ea acidic ea acidic ea acidic ea acidic ea acid ea acid ea acid ea acid e nang le acid e nang le acid e felileng e felletse ka ho lahleheloa ke ny. Karolo e setseng e akhehile haholo.
Ka ho le letšehali, bolelele ba likhechana bo hlahisoa ka lipara tsa Kilo - KBP)

Setšoantšo sa 2 | Ho Lahleheloa ke Botšepehi ba Lipehelo tsa Nucleic Acid
. Synthesis ea DNA e ntse e etsahala sekhechana se senyenyane. Leha ho le joalo, haeba sebaka sa Price se laoloang se haellang sekhechana sa DNA, ho qala ho hooa feela ho etsahala. Maemong a matle haholo, litšoantšo li ka lokolloa, empa likolo tse tla ba tse nyane le tse tlase tsa ho lemoha.
. Karolo ea temoso e telele, Ba-priers ba tla qhibiliha ho tloha Matrix DNA mme ba ke ke ba hlasimolla le tlasa maemo a tlase a likhoele.
.
Bothata bo bong bo tloaelehileng boo hangata bo kileng ba etsahala ho li-amids tsa limolek'hule tse fapaneng le li-acitac tsa nyutlelie li bapisoa le li-acide tsa nyutlelie-chloroform. Maemong a fetisisang, sena se ka amahanngoa le lijalo tsa bohata. Nako e ngata e ka bolokoa ka li-prisis tsa ho pheha kapa tsa enzymatic tsa selefounu, empa mokhoa ona hangata o fella ka ho lokolloa ha kutloelo-bohloko ka lebaka la tokollo e sa lekaneng ea nyutledi.

Ho thibela mosebetsi oa polymerase nakong ea ho qala

Ka kakaretso, thihibijo e sebelisoa e le mohopolo o ikhethileng ho hlalosa lintlha tsohle tse lebisang ho li-se-sephetho sa suboptimal pcr. Enochemical ea biochemical, thibelo e lekanyelitsoe ho tšebetso ea enzzy, ke hore, e thibela ho fetoloa ha sebui sa DNA.
Likarolo tsa sampole kapa li-buffers tse fapaneng le tse fapaneng tse nang le boea bo ka thibelang mohloaare kapa ho tšoaea litsobotsi tse kholo kapa tsa bohata tsa leshano.
Leha ho le joalo, litšebelisano tse ngata lipakeng tsa likarolo tsa karabelo le tse nang le acid ea nyutlelie le tsona li khethollotsoe e le 'PRhibitors'. Hang ha botšepehi ba sele bo sitisoa ke ho itšehla thajana le li-acid tsa nyutlelie, li ka hlaha tharollo le mohato o tiileng. Mohlala, 'scavengnts "e ka tlamahanya le kotsi ea ho sebelisana habeli le ho hokahana habeli le ho hloekisoa ka sejana se qetellong.
Ka kakaretso, li-inhibitors li teng ka har'a metsi a mangata le litlatsetso tsa bongaka tsa bongaka (li-applen tsa mali, mafura tikolohong (li-intonels , Litols tse boima)

Libibele tse atileng haholo li ka fumanoa libaktheria le lisele tsa eukaryotic, DNA e kopanya macromoleclules tsa li-tume le polasetiki. Ho hloekisoa ha li-acid tsa nyutlelie nakong ea kotlo kapa ka mor'a ho ahloloa ke mokhoa o khethiloeng bakeng sa ho tlosa li-inhibitors tsa PRR.
Kajeno, lisebelisoa tse fapaneng tsa ho tlosa li-actiction tsa ho tlosa li-actiction tse ngata li ka nkela li-protocol tse ngata tsa puo, empa 100% ea ho hlaphoheloa ka 100% le / kapa tlhoekiso ea lipheo ha e so fihle. Likhatiso tse ka bang lithibelo tse ka bang teng li ka ba teng ho acid acid acid acid kapa a ka 'na a hlahlojoa. Maphelo a fapaneng a teng ho fokotsa litlamorao tsa bafetoheli. Khetho ea polymerase e loketseng e ka ba le tšusumetso e kholo mosebetsing oa thibelo. Mekhoa e meng e netefalitsoeng ho fokotsa tlhahiso ea PRR e ntse e eketseha polao ea polymerase kapa ho sebelisa litlatsetso tse kang BSA.
Ho thibela ho etsa lipatlisiso ho ka bontšoa ke tšebeliso ea taolo ea boleng ba boleng ba eona (IPC).
Tlhokomelo e tlameha ho nkuoa ho tlosa lintlafatso tsohle le tharollo e 'ngoe ka linyeoe tse ling tse joalo, tse kang Ethanol, li-Is Ho latela khatello ea bona, ba ka kenya tšebetsong kapa ba inhibit Pcr.