PCR Analyzer Troubleshooting: Lipotso le Litharollo Tse Botsoang Hangata

Bahlahlobisisi ba Polymerase chain reaction (PCR) ke lisebelisoa tsa bohlokoa ho baeloji ea limolek'hule, tse lumellang bafuputsi ho holisa DNA bakeng sa lits'ebetso ho tloha ho lipatlisiso tsa lefutso ho isa tlhahlobong ea bongaka. Leha ho le joalo, joalo ka sesebelisoa leha e le sefe se rarahaneng, PCR analyzer e ka kopana le mathata a amang ts'ebetso ea eona. Sengoliloeng sena se bua ka lipotso tse ling tse tloaelehileng mabapi lePCR analyzerho rarolla mathata le ho fana ka tharollo e sebetsang ea mathata a tloaelehileng.

1. Ke hobane'ng ha karabelo ea ka ea PCR e sa ntlafatse?

E 'ngoe ea mathata a atileng haholo ao basebelisi ba tobaneng le ona ke ho se khonehe ha karabelo ea PCR ho holisa sepheo sa DNA. Sena se ka bakoa ke lintlha tse 'maloa:

Moralo o sa nepahalang oa li-primer: Etsa bonnete ba hore li-primers tsa hau li tobane le tatellano eo u e batlang, 'me li na le mocheso o phahameng oa ho qhibiliha (Tm). Sebelisa lisebelisoa tsa software bakeng sa moralo oa primer ho qoba ho tlama ka mokhoa o sa tobang.

DNA Template e sa lekaneng: Netefatsa hore o sebelisa palo e lekaneng ea DNA ea template. Ho fokola haholo ho tla fella ka ho fokola kapa ho se be matla.

Li-inhibitor tsa sampole: Litšilafalo tsa sampole li ka thibela karabelo ea PCR. Nahana ka ho hloekisa DNA ea hau kapa ho sebelisa mokhoa o fapaneng oa ho ntša.

Tharollo: Lekola moralo oa hau oa pele, eketsa mohopolo oa template, 'me u netefatse hore sampole ea hau ha e na li-inhibitors.

2. Hobaneng sehlahisoa sa ka sa PCR se sa lekana?

Haeba boholo ba sehlahisoa sa hau sa PCR se sa lebelloa, se ka supa bothata ka maemo a karabelo kapa metsoako e sebelisitsoeng.

Matlafatso e sa tobang: Sena se ka etsahala haeba primer e tlamella sebakeng se sa lebelloang. Lekola boits'oaro ba li-primers u sebelisa sesebelisoa se joalo ka BLAST.

Mocheso o Fosahetseng oa ho Aneha: Haeba thempereichara ea annealing e le tlase haholo, ho ka hlaha tlamo e sa tobang. Ntlafatso ea mocheso oa annealing ka gradient PCR.

Tharollo: Netefatsa boleng ba primer le ho ntlafatsa mocheso oa annealing ho ntlafatsa ho nepahala ha lihlahisoa tsa PCR.

3. My PCR analyser e bonts'a molaetsa oa phoso. ke etseng?

Melaetsa ea liphoso ho PCR analyzer e ka tšosa, empa hangata e ka fana ka lintlha tsa mathata a ka bang teng.

Mathata a ho lekanya: Etsa bonnete ba hore PCR analyzer e lekantsoe ka nepo. Tlhokomelo ea kamehla le ho hlahloba li-calibration li bohlokoa ho fumana liphetho tse nepahetseng.

Sehlopha sa Software: Ka linako tse ling, liphoso tsa software li ka baka mathata. Qala komporo ea hau bocha 'me u hlahlobe liapdeite tsa software.

THAROLLO: Sheba buka ea mosebedisi bakeng sa khoutu e itseng ea phoso 'me u latele mehato e khothalletsoang ea ho rarolla mathata. Tlhokomelo ea kamehla e ka thibela mathata a mangata.

4. Hobaneng ha liphetho tsa karabelo ea PCR ea ka li sa lumellane?

Liphetho tse sa lumellaneng tsa PCR li ka ferekanya ka mabaka a 'maloa:

Boleng ba Reagent: Netefatsa hore li-reagents tsohle, ho kenyeletsoa li-enzyme, li-buffer, le dNTP, li ncha ebile ke tsa boleng bo holimo. Li-reagents tse felletsoeng ke nako kapa tse silafetseng li ka baka phapang.

Thermal Cycler Calibration: Litlhophiso tsa mocheso tse sa tsitsang li ka ama ts'ebetso ea PCR. Kamehla hlahloba tekanyo ea sebaesekele sa mocheso.

Tharollo: Sebelisa li-reagents tsa boleng bo holimo 'me u lekanye baesekele ea hau ea mocheso khafetsa ho netefatsa liphetho tse tsitsitseng.

5. Joang ho ntlafatsa katleho ea karabelo ea PCR?

Ho ntlafatsa ts'ebetso ea karabelo ea PCR ho ka lebisa ho chai e phahameng le liphetho tse tšepahalang haholoanyane.

Ntlafatsa maemo a karabelo: Leka ka ho sebelisa likarolo tse fapaneng tsa li-primers, template ea DNA le MgCl2. Boitšoaro bo bong le bo bong ba PCR bo ka hloka maemo a ikhethileng bakeng sa ts'ebetso e nepahetseng.

Sebelisa li-enzyme tse phahameng haholo: Haeba ho nepahala ho le bohlokoa, nahana ka ho sebelisa DNA polymerase e phahameng ho fokotsa liphoso nakong ea ho holisa.

Tharollo: Etsa teko ea ho ntlafatsa ho fumana maemo a nepahetseng bakeng sa ho seta PCR ea hau.

Ka kakaretso

Ho rarolla mathata aPCR analyzere ka ba mosebetsi o boima, empa ho utloisisa mathata a tloaelehileng le tharollo ea ona ho ka ntlafatsa haholo boiphihlelo ba hau ba PCR. Ka ho rarolla mathata ana a tloaelehileng, bafuputsi ba ka ntlafatsa sephetho sa PCR le ho netefatsa liphetho tse tšepahalang lits'ebetsong tsa baeloji ea limolek'hule. Tlhokomelo ea kamehla, khetho e hlokolosi ea li-reagents, le ho ntlafatsa maemo a karabelo ke linotlolo tsa tlhahlobo e atlehileng ea PCR.