Ho rarolla Mathata a PCR Analyzer: Lipotso le Litharollo tse Botsoang Khafetsa

Bahlahlobi ba karabelo ea ketane ea polymerase (PCR) ke lisebelisoa tsa bohlokoa baelojing ea limolek'hule, tse lumellang bafuputsi ho ntlafatsa DNA bakeng sa lits'ebetso ho tloha lipatlisisong tsa lefutso ho isa ho litlhahlobo tsa bongaka. Leha ho le joalo, joalo ka sesebelisoa leha e le sefe se rarahaneng, mohlahlobi oa PCR a ka kopana le mathata a amang ts'ebetso ea sona. Sengoloa sena se bua ka lipotso tse ling tse tloaelehileng mabapi leMohlahlobi oa PCRho rarolla mathata le ho fana ka litharollo tse sebetsang mathateng a tloaelehileng.

1. Ke hobane'ng ha karabelo ea ka ea PCR e sa holise?

E 'ngoe ea mathata a tloaelehileng ao basebelisi ba tobanang le 'ona ke ho hloleha ha karabelo ea PCR ho matlafatsa DNA e reriloeng. Sena se ka bakoa ke mabaka a 'maloa:

Moralo o fosahetseng oa primer: Etsa bonnete ba hore li-primer tsa hau li ikhethile bakeng sa tatellano ea sepheo 'me li na le mocheso o motle oa ho qhibiliha (Tm). Sebelisa lisebelisoa tsa software bakeng sa moralo oa primer ho qoba ho tlama ho sa tobang.

DNA ea Template e sa Lekaneng: Netefatsa hore o sebelisa DNA ea template e lekaneng. E nyane haholo e tla fella ka ho fokola kapa ho se be le keketseho.

Lithibela-mafu tse ka har'a sampole: Litšila tse ka har'a sampole li ka thibela karabelo ea PCR. Nahana ka ho hloekisa DNA ea hau kapa ho sebelisa mokhoa o fapaneng oa ho ntša.

Tharollo: Hlahloba moralo oa hau oa primer, eketsa mahloriso a template, 'me u netefatse hore sampole ea hau ha e na li-inhibitor.

2. Ke hobane'ng ha sehlahisoa sa ka sa PCR se le boholo bo fosahetseng?

Haeba boholo ba sehlahisoa sa hau sa PCR bo sa lebelloa, e ka 'na ea bontša bothata ka maemo a karabelo kapa metsoako e sebelisitsoeng.

Ho eketsa matla a sa tobang: Sena se ka etsahala haeba primer e tlama sebakeng se sa reroang. Hlahloba ho hlaka ha primer u sebelisa sesebelisoa se kang BLAST.

Mocheso o Fosahetseng oa ho Hloekisa: Haeba mocheso oa ho hloekisa o le tlase haholo, ho ka hlaha tlamo e sa tobang. Ntlafatso ea mocheso oa ho hloekisa ka gradient PCR.

Tharollo: Netefatsa ho totobala ha primer mme o ntlafatse mocheso wa annealing ho ntlafatsa ho nepahala ha dihlahiswa tsa PCR.

3. Sehlahlobi sa ka sa PCR se bonts'a molaetsa oa phoso. Ke lokela ho etsa eng?

Melaetsa ea liphoso ho sehlahlobi sa PCR e ka tšosa, empa hangata e ka fana ka leseli la mathata a ka bang teng.

Mathata a ho Lekanya: Etsa bonnete ba hore sehlahlobi sa PCR se lekantsoe hantle. Litlhahlobo tsa tlhokomelo le tsa ho lekanya khafetsa li bohlokoa bakeng sa ho fumana liphetho tse nepahetseng.

Sehlopha sa Software: Ka linako tse ling, liphoso tsa software li ka baka mathata. Qala khomphutha ea hau hape 'me u hlahlobe lintlafatso tsa software.

THAROLLO: Sheba bukana ea mosebelisi bakeng sa khoutu e itseng ea liphoso 'me u latele mehato e khothaletsoang ea ho rarolla mathata. Tlhokomelo ea kamehla e ka thibela mathata a mangata.

4. Ke hobane'ng ha liphetho tsa karabelo ea ka ea PCR li sa tsitsane?

Liphetho tse sa tsitsang tsa PCR li ka baka mathata ka mabaka a 'maloa:

Boleng ba Reagent: Netefatsa hore li-reagent tsohle, ho kenyeletsoa le li-enzyme, li-buffer, le li-dNTP, li foreshe ebile li boleng bo holimo. Li-reagent tse felletsoeng ke nako kapa tse silafetseng li ka baka phapang.

Tekanyo ea Sesebelisi sa Thermal Cycler: Litlhophiso tsa mocheso o sa tsitsang li ka ama ts'ebetso ea PCR. Hlahloba khafetsa tekanyo ea sesebelisi sa thermal cycler.

Tharollo: Sebelisa li-reagent tsa boleng bo holimo 'me u lekanye motlakase oa hau oa thermal cycler khafetsa ho netefatsa liphetho tse tsitsitseng.

5. Mokhoa oa ho ntlafatsa katleho ea karabelo ea PCR joang?

Ho ntlafatsa katleho ea liketso tsa PCR ho ka lebisa chaing e phahameng le liphetho tse tšepahalang haholoanyane.

Ntlafatsa maemo a karabelo: Leka ho sebedisa mahloriso a fapaneng a di-primer, template ya DNA le MgCl2. Karabelo e nngwe le e nngwe ya PCR e ka hloka maemo a ikgethang bakeng sa tshebetso e ntle ka ho fetisisa.

Sebelisa li-enzyme tse nang le boleng bo holimo: Haeba ho nepahala ho le bohlokoa, nahana ka ho sebelisa polymerase ea DNA e nang le boleng bo holimo ho fokotsa liphoso nakong ea ho atolosoa.

Tharollo: Etsa teko ea ntlafatso ho fumana maemo a matle ka ho fetisisa bakeng sa tlhophiso ea hau e ikhethileng ea PCR.

Ka kakaretso

Ho rarolla mathata aMohlahlobi oa PCRE ka ba mosebetsi o boima, empa ho utloisisa mathata a tloaelehileng le litharollo tsa 'ona ho ka ntlafatsa haholo phihlelo ea hau ea PCR. Ka ho rarolla mathata ana a tloaelehileng, bafuputsi ba ka ntlafatsa liphetho tsa PCR le ho netefatsa liphetho tse tšepahalang lits'ebetsong tsa baeloji ea limolek'hule. Tlhokomelo ea kamehla, khetho e hlokolosi ea li-reagent, le ntlafatso ea maemo a karabelo ke linotlolo tsa tlhahlobo e atlehileng ea PCR.